核酸檢測實(shí)驗(yàn)是微觀的，基于細(xì)胞，分子，蛋白水平，而這些微觀樣本對外界環(huán)境的影響敏感，比如溫度、ph值、酶解、損傷等，在我們盡力呵護(hù)樣本的生存環(huán)境的同時，污染也是需要注意的頭等大事，要堅(jiān)決避免環(huán)境中的“雜質(zhì)”的亂入，包括樣本污染，試劑儀器交叉污染、產(chǎn)物氣溶膠污染等對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響?！耙撞椴灰撞臁?，污染來的悄無聲息，防不勝防，假陽性結(jié)果讓無數(shù)核酸檢測人員抓狂和崩潰。

一旦出現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境污染，比如樣本之間交叉污染、試劑污染、儀器污染、陽性對照污染、PCR擴(kuò)增產(chǎn)物污染、氣溶膠污染等，其中氣溶膠污染是一個非常重要而被忽視的污染源。實(shí)驗(yàn)室出現(xiàn)氣溶膠污染，需要較長的時間進(jìn)行根除。

一、氣溶膠污染原因

1、樣本之間交叉污染。

標(biāo)本污染主要有收集標(biāo)本的容器被污染；標(biāo)本存放運(yùn)輸時，由于密封不嚴(yán)或容器外粘有標(biāo)本而造成相互間交叉污染；核酸模板在提取過程中，由于加樣槍污染導(dǎo)致標(biāo)本間污染；手動提取核酸樣本時，污染的手套觸摸離心管內(nèi)蓋導(dǎo)致的污染；有些微生物標(biāo)本尤其是病毒可隨氣溶膠或形成氣溶膠而擴(kuò)散，導(dǎo)致彼此間的污染。

2、PCR試劑污染

PCR試劑在配制過程中，移液槍、槍頭、離心管等原因造成試劑被PCR核酸模板污染。

3、不同工作區(qū)域移液槍等耗材交叉使用。

將易污染區(qū)域的移液槍、槍頭、離心管等耗材拿到潔凈區(qū)使用引起的污染；

4、離心機(jī)轉(zhuǎn)子未定期擦拭。

離心機(jī)通常進(jìn)行各種試劑組分、不同盲樣的離心，如果離心管外部沾染病毒、陽性核酸或陽性質(zhì)粒，容易造成污染。

5、陽性對照造成的污染。

開蓋時間過長高濃度質(zhì)粒揮發(fā)到室內(nèi)，陽性對照組分未使用完任意丟棄，加完陽性對照的槍頭未放入消毒液中。

6、擴(kuò)增產(chǎn)物開蓋造成的污染。

這是PCR試驗(yàn)中較主要、較常見的污染原因。因?yàn)?/span>PCR產(chǎn)物拷貝量大，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于PCR檢測拷貝的極限，PCR產(chǎn)物開蓋后，極易迅速造成擴(kuò)散，極微量的PCR產(chǎn)物污染，就可形成假陽性。

7、各個實(shí)驗(yàn)室擦桌布、掃把，簸箕，工作服交叉使用。

二、核酸檢測實(shí)驗(yàn)室如何預(yù)防污染

1、合理的實(shí)驗(yàn)分區(qū)

原則上可以設(shè)置3個獨(dú)立的工作區(qū)域：

試劑耗材儲存與準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本處理和標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū)（核酸純化）、擴(kuò)增檢測區(qū)，各區(qū)域空間完全相互獨(dú)立，不能直接相通。其中試劑耗材儲存與準(zhǔn)備區(qū)必須獨(dú)立設(shè)置。

實(shí)驗(yàn)室實(shí)施空氣流向控制，擴(kuò)增前和擴(kuò)增后區(qū)域應(yīng)具有獨(dú)立通風(fēng)系統(tǒng)，擴(kuò)增后區(qū)域保持負(fù)壓狀態(tài)，其它區(qū)域保持正壓狀態(tài)，防止擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)入擴(kuò)增前的區(qū)域。

2、實(shí)驗(yàn)操作流程：

（1）樣品制備區(qū)進(jìn)行樣品處理，核酸提取；

（2）配液區(qū)配置反應(yīng)體系：酶混合液和PCR反應(yīng)液混合，分裝至PCR反應(yīng)管；

（3）樣品制備區(qū)加樣：樣品核酸和陰陽性對照加至反應(yīng)液中；

（4）PCR擴(kuò)增區(qū)上機(jī)擴(kuò)增檢測。務(wù)必保持單向操作流程，避免各區(qū)實(shí)驗(yàn)室污染。

3、各個實(shí)驗(yàn)區(qū)內(nèi)試驗(yàn)用品專區(qū)專用

配液區(qū)是較潔凈的試驗(yàn)區(qū)域，樣品制備區(qū)的潔凈度稍差， PCR擴(kuò)增區(qū)內(nèi)是較易被污染的區(qū)域，各區(qū)之間試驗(yàn)物品專區(qū)專用，避免因交叉使用造成實(shí)驗(yàn)室污染。

4、試驗(yàn)操作要規(guī)范

（1）正確使用移液槍，保證試劑配比和計量正確，同時避免液體吸入移液槍口造成污染。

（2）實(shí)驗(yàn)的過程中應(yīng)勤換手套，在進(jìn)出不同區(qū)域或進(jìn)行模板操作后，都應(yīng)及時更換手套。

（3）試劑盒各組分在打開之前應(yīng)先做瞬時離心(約10s)，將管壁及管蓋上的液體甩至管底部，從而減少污染手套或加樣器的機(jī)會。開管動作要輕，以防管內(nèi)液體濺出或形成氣溶膠，造成污染。

（4）樣本量較多時，應(yīng)將反應(yīng)液預(yù)混，再分裝至PCR反應(yīng)管，最后添加核酸模板，以減少單個添加操作繁瑣造成的污染。

（5）每次試驗(yàn)必須設(shè)定陰性對照和陽性對照，讀取結(jié)果時，在保證陰陽性對照均成立的情況下，判讀樣本結(jié)果才有效。

（6）實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，PCR反應(yīng)管嚴(yán)禁打開，及時放置殺孢子劑消毒液中浸泡。

三、解決核酸實(shí)驗(yàn)室污染方法

（1）開窗通風(fēng)：如在短時間內(nèi)要消除實(shí)驗(yàn)室污染，開窗通風(fēng)促進(jìn)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)空氣流通，使停留在室內(nèi)的核酸排放到室外。

（2）紫外燈照射：將實(shí)驗(yàn)室內(nèi)好生物安全柜內(nèi)物品平鋪，打開離心機(jī)內(nèi)蓋，然后將紫外等打開照射12-24小時，通風(fēng)12小時以上。

（3）清除劑降解核酸：及時用諾沃賽德清除劑擦拭操作臺面和儀器，按照1:10稀釋浸泡試驗(yàn)器具，同時按照1:3比例稀釋涮洗拖布擦拭地面。

（4）高壓：試驗(yàn)耗材、工作衣等進(jìn)行121℃30分鐘高壓。

（5）使用商品化NOVOCIDE核酸去除劑噴灑室內(nèi)降解核酸。

（6）陽性污染特別嚴(yán)重，可以采取干霧機(jī)配合核酸清除劑熏蒸實(shí)驗(yàn)室。

潤聯(lián)鐘工致力于核酸檢測實(shí)驗(yàn)室污染消毒多年，經(jīng)驗(yàn)豐富，熟悉生物實(shí)驗(yàn)室污染細(xì)節(jié)問題，能夠提出合理的解決方案，特別針對核酸氣溶膠污染這塊。潤聯(lián)引進(jìn)了歐菲姆干霧機(jī)和高效核酸清除劑，專業(yè)為實(shí)驗(yàn)室提供核酸污染解決服務(wù)，特別是核酸氣溶膠的污染問題。并且潤聯(lián)是歐菲姆品牌的擁有者，國內(nèi)合法正規(guī)有資質(zhì)的生產(chǎn)廠家，少數(shù)具有核酸清除報告的專業(yè)型企業(yè)。

我們能解決什么問題呢？

1）高效短時間清除實(shí)驗(yàn)室殘留的核酸片段污染

2）核酸檢測避免假陽性、解決CT值、起跳和翹尾等問題

3）降低擴(kuò)增產(chǎn)物陽性質(zhì)控品標(biāo)本污染風(fēng)險

潤聯(lián)，專注于生命科學(xué)領(lǐng)域的核酸污染治理與預(yù)防。于2021年自主推出環(huán)保型高效核酸片段清除劑:NOVOCIDE-AIR(諾沃賽德空氣)及NOVOCIDE-SUR(諾沃賽德表面)。基于該系列產(chǎn)品高效的去除核酸污染能力，潤聯(lián)配合推出了核酸污染清除儀系列產(chǎn)品，兩種產(chǎn)品的結(jié)合產(chǎn)生了1+1>2的效果，通過國內(nèi)權(quán)威疾控的測試，潤聯(lián)氣溶膠核酸污染整體去除方案能夠較大程度幫助使用者解決氣溶膠核酸污染問題，避免了假陽性，CT值翹尾、起跳出現(xiàn)。

核酸污染去除方案的特點(diǎn)：

1、預(yù)防核酸實(shí)驗(yàn)室環(huán)境空氣污染及核酸片段氣溶膠污染

2、有效氧化去除DNA、RNA污染源及核酸酶等污染源

3、極大程度降低了設(shè)備腐蝕性風(fēng)險

4、方案智能化操作且易實(shí)行，節(jié)省大量工作時間

5、適用于分子診斷中心、檢驗(yàn)室、PCR/P3/P4實(shí)驗(yàn)室、IVD試劑車間等

KV-BOX核酸污染清除儀,專為小型密閉腔體設(shè)計，采用全球領(lǐng)先的多級霧化技術(shù)，可以在不利用壓力的情況下產(chǎn)生接近氣態(tài)的霧化效果，與傳統(tǒng)HEPA原位消毒不同的是，KV-BOX 干霧可直接穿透HEPA進(jìn)行污染清除。該成果已申請多項(xiàng)專利，是目前能耗較少、霧化顆粒較均勻、擴(kuò)散性較好的核酸污染清除儀。

自2020年新冠疫情后，潤聯(lián)針對實(shí)驗(yàn)室核酸污染，研發(fā)出小型便攜智能且干霧效果極佳的核酸污染清除產(chǎn)品，同時，引進(jìn)了源自歐盟的諾沃賽德核酸清除劑，推出的核酸污染解決方案已有效幫助全國幾十家行業(yè)龍頭單位及機(jī)構(gòu)解決了核酸污染問題，這其中包括疾控中心、體外診斷試劑企業(yè)、醫(yī)院檢驗(yàn)科等，方案取得了老師們的一致認(rèn)可。

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